Пробоподготовка

lab-leonardo.com предлагает системы SureFood® для выделения и очистки ДНК перед проведением ПЦР.

ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) – это молекула, содержащая всю информацию об организме. Она обеспечивает хранение этой информации, ее использование и передачу потомству этого организма. ДНК присутствует в клетках всех живых организмов, а также у некоторых вирусов. Эта молекула состоит из нуклеотидов, содержащих одно из четырех азотистых оснований, углевод дезоксирибозу и фосфат. ДНК организмов, имеющих клеточное ядро, как одноклеточных, так и многоклеточных, представляет собой «двойную спираль» и является линейной. В ядре ДНК компактно свернута и находится в комплексе со структурными белками.

Анализ генетически модифицированных организмов с помощью ПЦР заключается в проверке, содержит ли объект чужую ДНК или, чаще, ДНК, характерную для определенной линии ГМО. Для его проведения необходимо использовать несвернутую ДНК, очищенную от структурных белков и веществ, способных ингибировать ПЦР. Особенно это важно при проведении количественной ПЦР, поскольку эта реакция чувствительна к ингибированию.

Чтобы получить очищенную, пригодную для исследования ДНК, необходимо провести пробоподготовку. Существует множество способов выделения и очистки ДНК. В системах SureFood® применяется сорбционный метод. Пробоподготовка этим методом заключается в лизисе материала пробы, который необходим, чтобы разрушить клетки и высвободить ДНК. Затем в лизат добавляют буфер и инкубируют в присутствии протеиназ, что позволяет разрушить сложные ткани и белки. После этого к раствору добавляют буфер для связывания, и эту смесь наносят на специальные фильтры, входящие в комплект поставки. Происходит связывание ДНК с носителем. Фильтры отмывают несколько раз и проводят их сушку для удаления из буфера этанола. Затем добавляют TE-буфер, который меняет ионную силу раствора и позволяет ДНК и фильтру-носителю разъединиться. Кроме того, этот буфер стабилизирует ДНК.

Преимущества сорбционного метода очистки ДНК перед другими методами состоят в скорости, высокой степени очистки (в этом плане это один из лучших методов) и возможности анализировать сложные матрицы, в том числе, готовые пищевые продукты.

Системы SureFood® PREP Basic и SureFood® PREP Advanced предназначены для выделения и очистки ДНК из пищевого сырья и обработанных продуктов и кормов для животных соответственно. С их помощью можно осуществлять пробоподготовку перед проведением ПЦР для определения ГМО, аллергенов и видовой принадлежности животных и рыб.